注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

乙酚紅瓊脂/Acetamide Agar250克國產(chǎn)/進口

苜蓿中華瘤菌 Sinorhizobium meliloti許旺酵母 Schwanniomyces occidentalis

硫酸十二烷基鈉瓊脂鼠疫桿菌抗噬菌體培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口

Caki-1, 人腎透細胞皮膚轉(zhuǎn)移細胞旺茲沃思沙門氏菌 Salmonella wandsworth

中分子量蛋白Marker蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis

鱗狀細胞抗原2(SCCA2)重組蛋白英文名稱：Recombinant Squamous Cell Carcinoma Antigen 2 (SCCA2)

明膠培養(yǎng)基(營養(yǎng)明膠) 規(guī)格： 100g 用途： 供測定細菌化明膠使用(GB15979-2002和GB/T4789.28－2003 中3.10，GB/T4789.35－2003)。

毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

K562全細胞裂解100μg100μg

類布氏桿菌 Lactobacillus parabuchneriHepG2/肝細胞

J774A.1(小鼠單核巨噬細胞)5×106cells/瓶×2

梭狀芽孢桿菌屬通用PCR檢測試劑盒廠家酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂/YPD瓊脂/YEPD瓊脂/Yeast Extract Peptone Dextrose Agar生物制品和蜜漿制劑酵母菌總數(shù)測定250克國產(chǎn)/進口

SD-39瓊脂/SD-39 Agar濾膜法大腸桿菌O157的分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口

1% NaC1纖維二糖發(fā)酵管BR20支國產(chǎn)/進口

大鼠淋巴成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細胞*培養(yǎng)基100mL

乙酰胺培養(yǎng)基 規(guī)格： 100g 用途： 用于革蘭氏性非發(fā)酵菌特別是綠膿桿菌的選擇性分離培養(yǎng)(化妝品衛(wèi)生規(guī)范微生物檢驗方法2007版)。

3%鈉三糖鐵瓊脂 規(guī)格： 250g 用途： 用于副溶血性弧菌的生化反應。(GB、SN)

白血病抑制因子(LIF)重組蛋白  Recombinant Leukemia Inhibitory Factor (LIF)

含卷螺旋域蛋白3(CCDC3)重組蛋白  Recombinant Coiled Coil Domain Containing Protein 3 (CCDC3)

趨化因子C-C-基元配體3樣蛋白1(CCL3L1)重組蛋白  Recombinant Chemokine C-C-Motif Ligand 3 Like Protein 1 (CCL3L1)

血紅素氧合酶2(HO2)重組蛋白  Recombinant Heme Oxygenase 2, Decycling (HO2)

FRhK-4(恒河猴胚腎細胞)5×106cells/瓶×2

CAL-27(人舌鱗細胞)5×106cells/瓶×2

RTE(大鼠氣管上皮細胞)5×106cells/瓶×2

人眼脈絡黑色素瘤細胞  MuM－2C

小鼠肝細胞  Hepa 1-6

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應用，并逐步應用于臨床。