注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環(huán)擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

人腎透明細胞腺細胞英文名稱：786-0

金直絲鏈霉菌 Streptomyces aureorectus大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

HL-60, 人早幼粒白血病細胞人腦動脈血管平滑肌細胞*培養(yǎng)基

WI38/VA13(SV-40Z轉肺成纖維細胞)5×106cells/瓶×2

環(huán)氧化合物水解酶4(EPHX4)重組蛋白英文名稱：Recombinant Epoxide Hydrolase 4 (EPHX4)

Dami(人巨核細胞白血病細胞)5×106cells/瓶×2

TE671 subline No.2(人橫紋肌肉瘤細胞)5×106cells/瓶×2

小鼠肺大靜脈內皮細胞*培養(yǎng)基HUVEC-12, 人臍靜脈血管內皮細胞系

GST標簽蛋白裂解20 ug20μg、100μg

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae彎曲桿菌 Lactobacillus curvatus

緩沖蛋白胨水(緩沖胨水增菌) (BPW) 規(guī)格： 250g 用途： 用于沙門氏菌前增菌培養(yǎng)。（美國FDA charpter 4）

河蟹顫抖病病毒PCR檢測試劑盒價格桑白皮素  Mulberry root bark pigment  分子量：*：30-2006

4-溴-3-甲-5-(三氟甲)-1H-吡唑    4- -3- (three -5-) -1H-*：60061-68-9分子量： C5H4BrF3N2

間溴甲  171.04  Between toluene*：591-17-3分子量： C7H7Br

DBD-COCl  332.76  DBD-COCl*：156153-43-4分子量： C11H13ClN4O4S

2,6-二甲啉  115.17  2,6- two methyl morpholine*：141-91-3分子量： C6H13NO

4,5,6,7-四氫噻吩并[3.2-c]吡  139.22  4,5,6,7- four [3.2-c] pyridine*：54903-50-3分子量： C7H9NS

麗春紅S  Ponceau S  760.61分子量： C22H12N4Na4O13*：6226-79-5

N-乙酰  150.18  N- hydracetin*：114-83-0分子量： C8H10N2O

丙  72.11  Hydrazine hydrate*：7422-78-8分子量： C3H8N2

雙(三氟乙酰氧)  430.04  Double (three fluorine acetoxy) iodobenzene*：2712-78-9分子量： C10H5F6IO4

噁唑  69.06  Oxazole*：288-42-6分子量： C3H3NO

技術原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。